फ्लोरोसेन्स फिल्टर हा फ्लोरोसेन्स मायक्रोस्कोपमधील एक आवश्यक घटक आहे.ठराविक प्रणालीमध्ये तीन मूलभूत फिल्टर असतात: एक उत्तेजना फिल्टर, एक उत्सर्जन फिल्टर आणि एक डायक्रोइक मिरर.ते सामान्यत: एका क्यूबमध्ये पॅक केले जातात जेणेकरून गट सूक्ष्मदर्शकामध्ये एकत्रितपणे घातला जाईल.
![结构](http://www.bestscopeus.com/uploads/结构1.jpg)
फ्लोरोसेन्स फिल्टर कसे कार्य करते?
उत्तेजना फिल्टर
उत्तेजना फिल्टर विशिष्ट तरंगलांबीचा प्रकाश प्रसारित करतात आणि इतर तरंगलांबी अवरोधित करतात.ते फिल्टर ट्यून करून फक्त एक रंग तयार करण्यासाठी वापरला जाऊ शकतो.उत्तेजना फिल्टर दोन मुख्य प्रकारांमध्ये येतात - लाँग पास फिल्टर आणि बँड पास फिल्टर.उत्तेजक हे सामान्यत: एक बँडपास फिल्टर असते जे फक्त फ्लोरोफोरद्वारे शोषलेल्या तरंगलांबी पार करते, अशा प्रकारे फ्लोरोसेन्सच्या इतर स्त्रोतांची उत्तेजना कमी करते आणि फ्लोरोसेन्स उत्सर्जन बँडमध्ये उत्तेजना प्रकाश अवरोधित करते.आकृतीतील निळ्या रेषेने दर्शविल्याप्रमाणे, BP 460-495 आहे, याचा अर्थ ते फक्त 460-495nm च्या फ्लोरोसेन्समधून जाऊ शकते.
हे फ्लोरोसेन्स मायक्रोस्कोपच्या प्रदीपन मार्गामध्ये ठेवलेले आहे आणि फ्लोरोफोर उत्तेजन श्रेणी वगळता प्रकाश स्रोताच्या सर्व तरंगलांबी फिल्टर करते.फिल्टर मिनिमम ट्रान्समिशन इमेजची ब्राइटनेस आणि तेज दर्शवते.कोणत्याही उत्तेजित फिल्टरसाठी किमान 40% ट्रांसमिशनची शिफारस केली जाते जेणेकरून ट्रांसमिशन आदर्शपणे 85%पेक्षा जास्त असेल.उत्तेजित फिल्टरची बँडविड्थ पूर्णपणे फ्लोरोफोर उत्तेजित श्रेणीमध्ये असावी जसे की फिल्टरची केंद्र तरंगलांबी (CWL) फ्लोरोफोरच्या शिखर उत्तेजित तरंगलांबीच्या शक्य तितक्या जवळ असेल.उत्तेजना फिल्टर ऑप्टिकल घनता (OD) पार्श्वभूमी प्रतिमेचा अंधार ठरवते;OD हे एक माप आहे की फिल्टर ट्रान्समिशन रेंज किंवा बँडविड्थच्या बाहेर तरंगलांबी किती चांगल्या प्रकारे अवरोधित करते.किमान 3.0 ची OD शिफारस केली जाते परंतु 6.0 किंवा त्याहून अधिक OD आदर्श आहे.
![वर्णपट आकृती](http://www.bestscopeus.com/uploads/Spectral-diagram.png)
उत्सर्जन फिल्टर
उत्सर्जन फिल्टर नमुन्यातील वांछनीय फ्लोरोसेन्स डिटेक्टरपर्यंत पोहोचू देण्याच्या उद्देशाने कार्य करतात.ते लहान तरंगलांबी अवरोधित करतात आणि दीर्घ तरंगलांबींसाठी उच्च प्रसारण करतात.फिल्टर प्रकार एका संख्येशी देखील संबंधित आहे, उदा. आकृतीमधील BA510IF (हस्तक्षेप अडथळा फिल्टर), ते पदनाम त्याच्या कमाल प्रसारणाच्या 50% तरंगलांबीचा संदर्भ देते.
उत्सर्जन फिल्टरसाठी समान शिफारसी उत्सर्जन फिल्टरसाठी सत्य आहेत: किमान ट्रांसमिशन, बँडविड्थ, OD आणि CWL.आदर्श CWL, किमान ट्रांसमिशन आणि OD संयोजन असलेले उत्सर्जन फिल्टर, शक्य तितक्या सखोल ब्लॉकिंगसह, शक्य तितक्या उज्ज्वल प्रतिमा प्रदान करते आणि सर्वात कमी उत्सर्जन सिग्नल शोधण्याची खात्री करते.
डायक्रोइक मिरर
डायक्रोइक मिरर उत्तेजना फिल्टर आणि उत्सर्जन फिल्टर दरम्यान 45° कोनात ठेवलेला असतो आणि डिटेक्टरकडे उत्सर्जन सिग्नल प्रसारित करताना फ्लोरोफोरच्या दिशेने उत्तेजना सिग्नल प्रतिबिंबित करतो.उत्तेजित फिल्टरच्या बँडविड्थसाठी >95% परावर्तन आणि उत्सर्जन फिल्टरच्या बँडविड्थसाठी 90% प्रसारणासह, आदर्श डायक्रोइक फिल्टर्स आणि बीम स्प्लिटरमध्ये कमाल परावर्तन आणि कमाल ट्रान्समिशन दरम्यान तीक्ष्ण संक्रमणे असतात.स्ट्रे-लाइट कमी करण्यासाठी आणि फ्लोरोसेंट इमेज सिग्नल-टू-आवाज गुणोत्तर जास्तीत जास्त करण्यासाठी, फ्लोरोफोरची छेदनबिंदू तरंगलांबी (λ) लक्षात घेऊन फिल्टर निवडा.
या आकृतीतील डायक्रोइक मिरर हा DM505 आहे, त्याला असे नाव देण्यात आले आहे कारण या आरशासाठी 505 नॅनोमीटर ही तरंगलांबी कमाल प्रसारणाच्या 50% आहे.या आरशासाठी ट्रान्समिशन वक्र 505 nm वरील उच्च प्रक्षेपण, 505 नॅनोमीटरच्या डावीकडे ट्रान्समिशनमध्ये तीव्र घट आणि 505 नॅनोमीटरच्या डावीकडे जास्तीत जास्त परावर्तकता दर्शविते परंतु तरीही काही प्रसारण 505 nm खाली असू शकते.
लाँग पास आणि बँड पास फिल्टरमध्ये काय फरक आहे?
फ्लूरोसेन्स फिल्टर्स दोन प्रकारांमध्ये विभागले जाऊ शकतात: लाँग पास (एलपी) आणि बँड पास (बीपी).
लाँग पास फिल्टर लांब तरंगलांबी प्रसारित करतात आणि लहानांना अवरोधित करतात.कट-ऑन तरंगलांबी हे पीक ट्रान्समिशनच्या 50% मूल्य असते आणि कट-ऑनच्या वरच्या सर्व तरंगलांबी लाँग पास फिल्टरद्वारे प्रसारित केल्या जातात.ते वारंवार डायक्रोइक मिरर आणि उत्सर्जन फिल्टरमध्ये वापरले जातात.जेव्हा ऍप्लिकेशनला जास्तीत जास्त उत्सर्जन संकलन आवश्यक असते आणि जेव्हा स्पेक्ट्रल भेदभाव इष्ट किंवा आवश्यक नसतो तेव्हा लाँगपास फिल्टरचा वापर केला पाहिजे, जे सामान्यतः पार्श्वभूमी ऑटोफ्लोरेसेन्सच्या तुलनेने कमी पातळी असलेल्या नमुन्यांमध्ये एकच उत्सर्जन करणारी प्रजाती निर्माण करणाऱ्या प्रोबसाठी असते.
बँड पास फिल्टर फक्त विशिष्ट तरंगलांबीचा बँड प्रसारित करतात आणि इतरांना ब्लॉक करतात.ते फ्लोरोफोर उत्सर्जन स्पेक्ट्रमचा फक्त सर्वात मजबूत भाग प्रसारित करण्याची परवानगी देऊन क्रॉसस्टॉक कमी करतात, ऑटोफ्लोरेसेन्स आवाज कमी करतात आणि अशा प्रकारे उच्च पार्श्वभूमी ऑटोफ्लोरेसेन्स नमुन्यांमध्ये सिग्नल-टू-आवाज गुणोत्तर सुधारतात, जे लाँग पास फिल्टर देऊ शकत नाहीत.
बेस्टस्कोप किती प्रकारचे फ्लूरोसेन्स फिल्टर सेट देऊ शकते?
काही सामान्य प्रकारच्या फिल्टरमध्ये निळा, हिरवा आणि अल्ट्राव्हायोलेट फिल्टरचा समावेश होतो.टेबलमध्ये दाखवल्याप्रमाणे.
फिल्टर सेट | उत्तेजना फिल्टर | डायक्रोइक मिरर | बॅरियर फिल्टर | एलईडी दिवा वेव्ह लांबी | अर्ज |
B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | · FITC: फ्लोरोसेंट अँटीबॉडी पद्धत अॅसिडीन ऑरेंज: डीएनए, आरएनए ऑरामाइन: ट्यूबरकल बॅसिलस ·EGFP, S657, RSGFP |
G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | रोडामाइन, TRITC: फ्लोरोसेंट अँटीबॉडी पद्धत प्रोपीडियम आयोडाइड: डीएनए आरएफपी |
U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · ऑटो-फ्लोरोसेन्स निरीक्षण · DAPI: DNA डाग · Hoechest 332528, 33342: क्रोमोसोम स्टेनिंगसाठी वापरले जाते |
V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | कॅटेकोलामाइन्स · 5-हायड्रॉक्सी ट्रिप्टामाइन टेट्रासाइक्लिन: स्केलेटन, दात |
R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 · अलेक्सा फ्लोर 633, अलेक्सा फ्लोर 647 |
फ्लूरोसेन्स ऍक्विझिशनमध्ये वापरल्या जाणार्या फिल्टर सेटची रचना फ्लोरोसेन्स ऍप्लिकेशन्समध्ये वापरल्या जाणार्या प्रमुख तरंगलांबीच्या आसपास केली जाते, जी सर्वात जास्त वापरल्या जाणार्या फ्लोरोफोर्सवर आधारित असते.या कारणास्तव, त्यांना DAPI (निळा), FITC (हिरवा) किंवा TRITC (लाल) फिल्टर क्यूब्स सारख्या इमेजिंगसाठी असलेल्या फ्लोरोफोरच्या नावावर देखील नाव देण्यात आले आहे.
फिल्टर सेट | उत्तेजना फिल्टर | डायक्रोइक मिरर | बॅरियर फिल्टर | एलईडी दिवा वेव्ह लांबी |
FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
टेक्सास रेड | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
![प्रतिमा](http://www.bestscopeus.com/uploads/Images.png)
तुम्ही फ्लोरोसेन्स फिल्टर कसे निवडता?
1. फ्लूरोसेन्स फिल्टर निवडण्याचे तत्व म्हणजे फ्लूरोसेन्स/उत्सर्जन प्रकाश इमेजिंगच्या शेवटच्या बाजूने जाऊ देणे आणि त्याच वेळी उत्तेजित प्रकाश पूर्णपणे अवरोधित करणे, जेणेकरून सर्वोच्च सिग्नल-टू-आवाज गुणोत्तर मिळवता येईल.विशेषत: मल्टीफोटॉन उत्तेजना आणि एकूण अंतर्गत प्रतिबिंब सूक्ष्मदर्शकाच्या वापरासाठी, कमकुवत आवाज देखील इमेजिंग प्रभावामध्ये मोठ्या प्रमाणात हस्तक्षेप करेल, म्हणून सिग्नल ते आवाज गुणोत्तराची आवश्यकता जास्त आहे.
2. फ्लोरोफोरची उत्तेजना आणि उत्सर्जन स्पेक्ट्रम जाणून घ्या.काळ्या पार्श्वभूमीसह उच्च-गुणवत्तेची, उच्च-कॉन्ट्रास्ट प्रतिमा निर्माण करणारा फ्लूरोसेन्स फिल्टर संच तयार करण्यासाठी, उत्तेजना आणि उत्सर्जन फिल्टर्सने फ्लोरोफोर उत्तेजित शिखरे किंवा उत्सर्जनाशी संबंधित असलेल्या प्रदेशांवर किमान पासबँड रिपलसह उच्च प्रसारण साध्य केले पाहिजे.
3. फ्लोरोसेन्स फिल्टरची टिकाऊपणा विचारात घ्या.हे फिल्टर अतिनील प्रकाश स्रोतांसाठी अभेद्य असले पाहिजेत जे अल्ट्राव्हायोलेट (UV) प्रकाश निर्माण करतात ज्यामुळे "बर्नआउट" होऊ शकते, विशेषत: उत्तेजक फिल्टर कारण ते प्रदीपन स्त्रोताच्या पूर्ण तीव्रतेच्या अधीन आहे.
भिन्न फ्लूरोसंट नमुना प्रतिमा
![BS-2083F+BUC5F-830CC च्या फ्लोरोसेन्स प्रतिमा](http://www.bestscopeus.com/uploads/Fluorescence-Images-of-BS-2083F+BUC5F-830CC.jpg)
![BS-2081F+BUC5IB-830C च्या फ्लोरोसेन्स प्रतिमा](http://www.bestscopeus.com/uploads/Fluorescence-Images-of-BS-2081F+BUC5IB-830C.jpg)
संसाधने इंटरनेटवर संकलित आणि व्यवस्थापित केली जातात आणि ती फक्त शिकण्यासाठी आणि संप्रेषणासाठी वापरली जातात.कोणतेही उल्लंघन असल्यास, कृपया हटविण्यासाठी आमच्याशी संपर्क साधा.
पोस्ट वेळ: डिसेंबर-०९-२०२२